芒果组培-贝科新肽(推荐商家)

植株分化与生根培养将阳性胚性愈伤转入分化培养基，光照条件下培养，诱导芽体分化、幼苗生长；待幼苗长至3–5cm、具备完整茎叶结构后，转入生根培养基诱导根系生长，培系发达、长势健壮的完整组培苗。 炼苗移栽与分子鉴定打开组培瓶封口膜，室内炼苗3–5天，适应外界温湿度环境后，清洗根部培养基残渣，移栽至温室大田培养，获得T0代植株。提取植株基因组DNA，通过PCR、荧光定量PCR、Southern杂交鉴定外源基因整合与表达情况；收获T1及后代种子，连续自交筛选，获得遗传稳定的纯合株系。




载体构建与菌株活化根据实验需求构建植物表达载体，将目的基因、特异性启动子、终止子、抗性筛选标记（潮抗性、草铵抗性为水稻常用筛选标记）插入二元载体T-DNA区域，测序验证序列无误后，将重组载体导入EHA105等农杆菌感受态细胞，芒果组培，筛选阳性单菌落，活化备用。2. 水稻愈伤组织诱导选取饱满无破损的水稻成熟种子，去除外壳，经过酒精、次梯度无菌消毒后，接种于愈伤诱导培养基。26–28℃避光暗培养2–3周，诱导种子盾片产生淡黄色、颗粒状、致密的胚性愈伤组织，剔除褐化、水渍化的无效愈伤，挑选胚性愈伤作为转化受体。




基因轰击法（微粒轰击法）纯物理转化技术，不依赖农杆菌生物侵染体系，是水稻早期研究的方法，目前仅作为特殊实验的辅助手段。1. 机制将重组质粒DNA包裹于金粉、钨粉微米级微粒表面，通过基因高压加速微粒，穿透水稻细胞壁与细胞膜，将外源DNA送入细胞核，随机整合至水稻基因组中，实现基因转化。2. 适用场景适配农杆菌侵染困难的特殊籼稻基因型、水稻悬浮细胞、原生质体；可用于多基因共转化、基因编辑载体瞬时表达、细胞器基因转化等特殊实验场景。




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