冷冻 TEM（近天然结构）
原理：样品快速浸入液态玻璃化，全程无化学固定 / 脱水 / 染色，在液氮低温下成像，可观察真实双层膜、内容物，适合高分辨率结构研究。
流程：3 μL 样品滴多孔碳网 → 滤纸轻吸成薄水膜 → 液态冷冻 → 液氮转移至电镜冷台（-170℃以下）成像；冷冻断层扫描（cryo-ET）可重构 3D 结构。
优点：结构保真度极高；缺点：设备昂贵、操作复杂。
超薄切片 TEM
用于细胞内 / 组织中外泌体定位，或观察群体分布；流程： + 双固定 → 梯度脱水 → 环氧树脂包埋 → 切片机切成 40–90 nm 薄片 → 醋酸铀 + 柠檬酸铅染色 → TEM 观察。
外泌体分离纯化是检测的前提，目标是从复杂体液中分离出高纯度、高活性的外泌体，去除蛋白质、脂质复合物等杂质干扰。目前常用的分离纯化技术主要包括以下几种：离心法是外泌体分离的“金标准”，通过不同转速的离心步骤，逐步去除细胞碎片、大囊泡等杂质，外泌体检测服务，终获得外泌体，该方法纯度较高，但操作繁琐、耗时较长，且可能导致外泌体结构破坏，不利于后续活性分析与内容物提取。密度梯度离心法在离心的基础上加入密度介质，通过密度差异实现外泌体的分离，纯度优于普通离心法，但同样存在操作复杂、通量低的问题。
几乎所有类型的细胞在正常生理状态或病理状态下都能分泌外泌体，包括免疫细胞、细胞、、上皮细胞、神经细胞等。不同细胞分泌的外泌体在数量、大小、形态及内部成分上存在显著异质性，这种异质性与细胞的类型、生理状态及所处的微环境密切相关。例如，细胞分泌的外泌体数量通常显著高于正常细胞，且其内部包裹的生物分子（如癌基因、microRNA、相关蛋白等）能够促进的增殖、侵袭、转移及血管生成，参与微环境的调控；分泌的外泌体则富含营养因子和分子，具有组织修复、、免疫调节等功能，在再生医学领域具有广泛的应用前景。
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