免疫电镜（Immuno-TEM）结合胶体金标记的特异性，定位外泌体表面 / 内部蛋白（如 CD63、CD81、TSG101），用于外泌体亚群鉴定与功能验证。
关键问题与质控
背景过深 / 颗粒聚集：多为染色时间过长、样品浓度过高或盐未洗净；优化染色时长、稀释样品、增加超纯水漂洗步骤。
无典型膜结构：可能是蛋白聚集体或脂蛋白；结合 NTA 粒径分析、Western blot（检测外泌体标志蛋白）联合鉴定。
重复性：需拍摄 10 个以上不同视野，统计粒径分布与形态比例。
外泌体内容物（核酸、蛋白质等）的检测是挖掘其临床价值的关键，传统检测技术以单一标志物检测为主，新兴技术则朝着多重检测、高灵敏度、高通量的方向发展。传统核酸检测技术包括实时荧光定量PCR（qRT-PCR）、逆转录PCR（RT-PCR）等，可检测外泌体中miRNA、mRNA等核酸的表达水平，外泌体检测服务，操作相对简便、成本较低，但存在操作繁琐、灵敏度不足、无法实现多重检测等局限，且需裂解外泌体提取核酸，可能导致核酸丢失与降解。蛋白质检测技术除WB、ELISA外，还包括蛋白质芯片技术，可同时检测多种蛋白质标志物，但灵敏度有待提升。
外泌体电镜是纳米级外泌体（直径通常 30–150 nm）形态鉴定与结构分析的技术，主流为透射电镜（TEM，含负染、超薄切片）、冷冻透射电镜（Cryo-TEM），辅以扫描电镜（SEM）和电子断层扫描（ET），是外泌体 “金标准” 鉴定方法之一（常与 NTA、Western blot 联用）。
常用技术与流程
负染 TEM（常规）
原理：用 2% 磷钨酸（PTA，pH 6.5–7.0）或醋酸双氧铀染背景，样品本身不被强染，形成亮边暗中心的反差，清晰显示双层膜与杯状 / 茶托形态。
流程：碳支持膜铜网滴样（5–10 μL，静置 10 min 吸附）→ 滤纸侧吸余液 → 负染 1–2 min → 吸干晾干 → 80–120 kV、50k–100k 倍观察。
优点：快速、成本低、样品需求量小；缺点：化学染色可能轻微改变结构，盐结晶易干扰。
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