






依托改造后的根癌农杆菌Ti质粒T-DNA转移系统,去除质粒致瘤基因,构建安全的二元载体、三元载体系统。将目的基因与筛选标记基因插入T-DNA区域,在农杆菌Vir毒蛋白的诱导作用下,T-DNA切割、转移并整合至水稻细胞核基因组,实现外源基因的稳定插入与表达。常用农杆菌菌株为EHA105、AGL-1,适配水稻愈伤组织侵染体系。
适用受体材料受体为水稻成熟种子诱导的胚性愈伤组织,材料获取不受季节、生育期限制,可全年开展转化实验;其次可选用水稻幼胚、幼穗诱导愈伤,再生能力更强,但取材受限。粳稻愈伤诱导与再生效率显著优于籼稻,小麦基因转化,籼稻是目前水稻转化的主要难点材料。
优点:外源基因多为单拷贝或低拷贝整合,基因沉默概率低,植株性状稳定、遗传重复性好,适合商业化品种培育;操作成本低、载体体系成熟。缺点:传统体系基因型依赖性极强,多数玉米骨干自交系转化效率极低;侵染、共培养条件严苛,实验容错率低。
基因轰击法(微粒轰击法)1990年成功应用于玉米植株创制,是早实现玉米商业化转化的技术,属于纯物理转化方式,不依赖生物载体。
组培苗弱、移栽率高原因:生根不充分、炼苗时间不足、根部残留琼脂滋生杂菌。解决:延长生根培养、规范炼苗流程、清洗根部培养基。
总结水稻组培的成功关键不在于流程复杂,而在于愈伤质量把控、侵染参数、筛选严格、环境稳定。粳稻重标准化操作,籼稻重抗褐化与胚性维持。稳定的组培体系,是水稻基因转化获得高阳性率、高再生率、稳定遗传株系的前提。
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