水稻基因转化原理
水稻基因转化的流程与禾本科作物通用逻辑一致，即外源基因递送—基因组整合—愈伤再生—植株驯化—稳定遗传。通过生物介导、物理或化学转化手段，将携带目的基因、启动子、终止子、筛选标记的外源DNA导入水稻受体细胞，依靠细胞自身重组机制完成外源基因的基因组整合；再通过水稻专属组织培养体系，将转化后的愈伤组织、胚性为完整植株，经过多代筛选与分子鉴定，获得性状稳定、可稳定遗传的水稻株系。
载体构建与菌株活化根据实验需求构建植物表达载体，将目的基因、特异性启动子、终止子、抗性筛选标记（潮抗性、草铵抗性为水稻常用筛选标记）插入二元载体T-DNA区域，测序验证序列无误后，将重组载体导入EHA105等农杆菌感受态细胞，筛选阳性单菌落，活化备用。2. 水稻愈伤组织诱导选取饱满无破损的水稻成熟种子，水稻基因转化，去除外壳，经过酒精、次梯度无菌消毒后，接种于愈伤诱导培养基。26–28℃避光暗培养2–3周，诱导种子盾片产生淡黄色、颗粒状、致密的胚性愈伤组织，剔除褐化、水渍化的无效愈伤，挑选胚性愈伤作为转化受体。
抗性筛选与植株再生共培养结束后，将幼胚转移至含筛选压力的培养基上，分批筛选抗性愈伤组织，淘汰未转化的阴性细胞；将阳性抗性愈伤转入分化培养基，诱导芽体分化，再转入生根培养基培育完整幼苗；炼苗后移栽至温室培养，获得T0代植株。 分子鉴定与纯合株系筛选对T0代植株提取DNA，通过PCR、Southern杂交检测外源基因整合情况，通过RT-PCR、Western blot检测基因表达水平；收获T1代种子后，连续多代自交，结合分子检测筛选获得遗传稳定的纯合株系。
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