外泌体检测服务-贝科新肽(在线咨询)

标志性分子检测是外泌体鉴定的，ISEV推荐检测的阳性标志物包括跨膜蛋白CD63、CD9、CD81，溶质蛋白TSG101、Alix等，同时需检测Calnexin等阴性标志物，外泌体检测服务，排除杂质干扰。常用检测方法包括Western Blot（WB）与流式细胞术：WB通过电泳分离、转膜、孵育等步骤，检测特定蛋白条带，可验证标志物的存在，但操作繁琐、灵敏度较低；流式细胞术借助荧光标记与外泌体表面抗原结合，可快速、定量检测表面标志物表达，确定外泌体纯度与数量，但对样本纯度要求较高，易出现假阳性结果。

植物外泌体（植物源外泌体样纳米颗粒，PELNs）检测以形态、粒径、浓度、生化组成、纯度为，优先用TEM+NTA+WB / 质谱组合鉴定，再做功能与质控检测。

一、鉴定三要素（ISEV 标准）

1. 形态学观察（TEM/SEM/AFM）

透射电镜（TEM）：金标准，可见双层膜、杯状 / 茶托状、近球形结构，粒径 30–150 nm。

扫描电镜（SEM）：看表面形貌与分散性。

原子力显微镜（AFM）：测三维形貌与膜厚度。

2. 粒径与浓度（NTA/DLS）

纳米颗粒跟踪分析（NTA）：单颗粒，给出粒径分布（30–150 nm 为主）、浓度、多分散性，适合复杂样本。

动态光散射（DLS）：测平均粒径与 PDI，适合单分散体系，不能替代 NTA。

合格参考：主峰 30–150 nm，浓度≥1×10? particles/mL。

冷冻 TEM（近天然结构）

原理：样品快速浸入液态玻璃化，全程无化学固定 / 脱水 / 染色，在液氮低温下成像，可观察真实双层膜、内容物，适合高分辨率结构研究。

流程：3 μL 样品滴多孔碳网 → 滤纸轻吸成薄水膜 → 液态冷冻 → 液氮转移至电镜冷台（-170℃以下）成像；冷冻断层扫描（cryo-ET）可重构 3D 结构。

优点：结构保真度极高；缺点：设备昂贵、操作复杂。

超薄切片 TEM

用于细胞内 / 组织中外泌体定位，或观察群体分布；流程： + 双固定 → 梯度脱水 → 环氧树脂包埋 → 切片机切成 40–90 nm 薄片 → 醋酸铀 + 柠檬酸铅染色 → TEM 观察。

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