免疫 TEM
结合胶体金标记的特异性（如 CD63、CD9），可在电镜下直接定位外泌体表面标志物，实现形态与分子特征的同步验证。
SEM
聚焦样品表面形貌，需喷金导电处理；分辨率略低于 TEM，多用于观察外泌体在材料 / 细胞表面的附着形态，而非内部精细结构。
关键质控与判读要点
典型外泌体：30–150 nm，双层膜，常呈杯状；无膜的球形颗粒多为脂蛋白 / 蛋白聚集体；盐结晶呈规则几何状，需区分。
样品浓度需合适（推荐≥10? particles/mL），过浓重叠、过稀难寻；PTA 的 pH 必须接近中性，避免膜损伤。
观察用低剂量模式，减少电子束对样品的辐照损伤。
TEM用于外泌体研究的实验流程主要包括样品制备、染色、电镜观察及图像分析四个步骤，其中样品制备是关键环节，直接影响成像质量和结果准确性，具体流程如下：步，外泌体提取与纯化。首先从细胞培养液、、血浆、尿液等样本中提取外泌体，常用的提取方法包括离心法、密度梯度离心法、聚乙二醇沉淀法、超滤法、免疫磁珠法、排阻色谱法等，其中离心法是常用的方法，通过不同转速的离心，去除细胞碎片、大颗粒杂质及蛋白质 aggregates，获得相对纯化的外泌体沉淀。为了提高外泌体的纯度，提取后通常还需要进行二次离心或纯化处理，外泌体免疫电镜，避免杂质对成像的干扰。需要注意的是，提取过程中应严格控制离心条件（转速、时间、温度），避免外泌体的膜结构被破坏，同时尽量避免反复冻融，防止外泌体形态发生改变。
外泌体的内部结构较为复杂，包含多种生物活性分子，具体成分因细胞来源而异。其中，蛋白质类成分包括酶、细胞骨架蛋白、信号分子、抗原呈递蛋白等；核酸类成分包括mRNA、microRNA、lncRNA、circRNA、DNA片段等，这些核酸能够在中发挥调控作用，参与基因表达的调节；脂质类成分包括甘油三酯、磷脂酰丝氨酸、神经酰胺等，不仅构成外泌体的膜结构，还能参与信号传递和细胞间相互作用。外泌体的这些结构和成分特征，决定了其在细胞间通讯和疾病发展中的作用，也为电镜技术的表征提供了明确的靶点。
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