主流电镜技术与流程
传统透射电镜（负染 TEM，常用）
样品制备：纯化外泌体悬液（离心 + 0.22 μm 过滤），滴至 Formvar / 碳膜铜网吸附（5–30 min）；2% 预固定，外泌体检测浓度，再用 1–2% 醋酸铀（UA）或 2% 磷钨酸（PTA，pH 6.5–7.0）负染（0.5–2 min），吸干后室温干燥。
成像参数：加速电压 80–120 kV，放大倍数 50，000–100，000×，低剂量模式避免样品损伤。
典型图像：双层膜清晰，呈亮边暗背景的杯状 / 圆形，直径符合 30–150 nm 范围；盐结晶为规则几何形、细胞碎片不规则，需排除。
电子断层扫描是一种能够实现样品三维结构重构的电镜技术，其原理是利用电子束对样品进行多角度（通常为±60°）倾斜拍摄，获取系列二维图像，然后通过计算机软件对这些二维图像进行对齐、重构，生成样品的三维结构模型，从而呈现样品的空间形态和内部成分分布。在了你外泌体研究中，ET技术通常与TEM或Cryo-TEM结合使用，分别称为TEM-ET和Cryo-ET，其中Cryo-ET由于能够保留外泌体的天然形态，应用更为广泛，是研究外泌体三维结构的技术之一。
标准检测流程（推荐）
样本前处理：收集质外体液 / 汁液，过滤（0.45/0.22 μm），去多糖 / 多酚 / 果胶。
分离纯化：差速离心→密度梯度离心 / 尺寸排阻 / 超滤→浓缩。
鉴定：
TEM：形态 + 粒径
NTA：粒径分布 + 浓度
WB / 质谱：标志蛋白
核酸 / 脂质分析
纯度验证：粒子 / 蛋白比、破膜实验、污染标志物检测。
功能验证：细胞摄取、活性、 / 抗病等。
五、质控与合规（如 FDA DMF）
纯度、粒径 / 浓度、形态、蛋白 / 核酸 / 脂质组成、稳定性、生物活性、安全性（细胞毒性）、抗原性。
植物外泌体检测难点
植物样本含大量多糖、多酚、果胶、细胞壁碎片，易共沉淀，干扰检测。
缺乏广谱、高特异性植物外泌体，标志物鉴定受限。
提取量极低（1 kg 样本≈μg 级），需高灵敏度方法。
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